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Istologia

L'istologia è il settore della biologia che studia la composizione, la struttura e le caratteristiche dei tessuti organici degli esseri viventi. L'istologia è strettamente legata all'anatomia microscopica, poiché il suo studio non si ferma ai tessuti, ma va oltre, osservando anche le cellule e altri corpuscoli, ed è collegata alla biochimica, alla citologia e alla medicina.

L'istologia è diventata molto importante in medicina e biologia in quanto è cruciale per le seguenti discipline: biochimica, biologia molecolare e fisiologia da un lato e i processi patologici e le loro conseguenze dall'altro.

Le tecniche classiche di istologia sono applicate nei laboratori medici per la diagnosi di una grande varietà di malattie. Queste tecniche sono adeguate nella maggior parte dei casi diagnostici. Tuttavia, quando la diagnosi con queste tecniche classiche non può essere considerata affidabile, devono essere utilizzati metodi aggiuntivi. Queste tecniche includono la colorazione istochimica, metodi immunoistochimici, ibridazione del DNA, ibridazione in situ a fluorescenza (FISH), PCR, citometria a flusso ecc.

I laboratori medici di cui sopra si concentrano principalmente sulla scienza applicata basata sul numero di test diagnostici prodotti, al contrario dei laboratori di ricerca che si concentrano sulla scienza di base su base accademica.

Un laboratorio medico o laboratorio clinico è il luogo in cui i test vengono solitamente eseguiti su campioni clinici per ottenere informazioni sulla salute di un paziente in termini di diagnosi, trattamento e prevenzione delle malattie.

I laboratori di ricerca utilizzano tecniche convenzionali per le procedure di genomica, proteomica e coltura cellulare.
I prodotti a marchio PanReac AppliChem per i laboratori ospedalieri:

• Laboratori medici: Prodotti di microscopia.
• Laboratori di ricerca: Prodotti di genomica, proteomica e coltura cellulare.

Laboratori medici
In molti paesi ci sono principalmente due tipi di laboratori medici a seconda del tipo di ricerca effettuata.

• Laboratori ospedalieri: laboratori integrati in un ospedale per eseguire test sui campioni dei pazienti. Ci sono 4 diversi tipi di laboratori
• Laboratori di patologia clinica: ematologia, istopatologia, citologia, patologia di routine.
• Laboratori di microbiologia clinica: batteriologia, micobatteriologia, virologia, micologia, parassitologia, immunologia, sierologia.
• Laboratori di biochimica clinica: analisi biochimiche, test ormonali, ecc.
• Laboratorio di diagnostica molecolare o laboratorio di citogenetica e biologia molecolare.Laboratori clinici esterni: per test estremamente specializzati, il campione può andare a un laboratorio di ricerca esterno.

ITW Reagents offre una gamma completa di prodotti per istologia, ematologia e microbiologia con il marchio PanReac AppliChem, compresi i reagenti più comunemente usati nel processo di preparazione dei campioni per l'esame microscopico. Questa gamma copre tutte le fasi di fissazione, pulizia, inclusione in paraffina, colorazione e montaggio. I reagenti ITW hanno anche una vasta gamma di prodotti per la ricerca in diverse aree nelle Scienze della Vita per saggi da sviluppare nei laboratori ospedalieri: genomica, proteomica e coltura cellulare.

Molti dei prodotti a marchio PanReac AppliChem utilizzati in microscopia portano il marchio CE IVD in conformità al nuovo Regolamento europeo (UE) 2017/746 sui prodotti diagnostici in vitro (IVDR).

Tecniche e fasi del trattamento istologico
Sebbene la maggior parte delle fasi del trattamento istologico siano comuni, alcune di esse sono uniche per un singolo tipo di trattamento del campione. Ad esempio, l'inclusione viene eseguita solo sui tessuti e la fissazione termica solo sui campioni di sangue.

Tecniche e fasi di lavorazione istologica
Sebbene la maggior parte delle fasi del trattamento istologico siano comuni, alcune di esse sono uniche per un singolo tipo di trattamento del campione. Per esempio, l'embedding viene fatto solo sui tessuti e la fissazione a caldo solo sui campioni di sangue.
Le fasi più comuni e i prodotti utilizzati sono i seguenti:

• Fissazione: La fissazione interrompe i processi di degradazione che avvengono dopo la morte cellulare, cercando di preservare il tessuto/architettura cellulare e la composizione il più vicino possibile a come era nell'organismo vivente. Il tipo più comune è la fissazione chimica con Formaldeide 3.7-4.0% w/v tamponata a pH=7 e stabilizzata con metanolo e, per una maggiore sicurezza, Histofix^® Formaldeide monodose pronta all'uso.
• Disidratazione e pulizia: La disidratazione è la rimozione completa dell'acqua dal campione o dal tessuto in modo che possa essere correttamente incorporato nei successivi mezzi di incorporazione non solubili in acqua. I campioni fissati e lavati vengono passati in alcool al 96% e poi in alcool assoluto per un tempo variabile, in genere un'ora e mezza in ogni bagno. La chiarificazione è la sostituzione dell'agente essiccante con una sostanza miscibile con il mezzo di incorporazione da utilizzare. I prodotti più comuni in questa fase sono gli alcoli come l'etanolo assoluto, l'etanolo al 96%, l'etanolo al 70%, che possono essere denaturati o meno, così come lo xilene.
• Inclusione: con l'inclusione, l'acqua del tessuto viene sostituita da un mezzo liquido capace di solidificare in condizioni di temperatura adeguate. A questo scopo si utilizza la cera di paraffina P.F. 55-58°C plastificata + DMSO o semplicemente la cera di paraffina P.F. 56-58°C.
• Taglio: I tessuti inclusi in paraffina sono tagliati abbastanza sottili (4-6 micron) da permettere il passaggio della luce per l'esame al microscopio. Questo viene fatto con un microtomo: uno strumento meccanico usato per fare sezioni micrometriche di tessuto. Raccomandiamo il nostro pulitore di paraffina per mantenere pulito il microtomo.
• Disincrostazione-idratazione: La deceratura-idratazione è il processo di rimozione del mezzo di inclusione dalle sezioni di tessuto in paraffina e la loro reidratazione per una corretta penetrazione del colorante. I reagenti più comuni in questa fase sono gli alcoli come l'Etanolo assoluto, l'Etanolo 96%, l'Etanolo 70% che possono essere o meno denaturati oltre allo Xilene.
• Colorazione: La maggior parte dei tessuti, specialmente quelli di origine animale, sono incolori a meno che non contengano pigmenti. È quindi necessario colorarli per l'osservazione al microscopio. Ciò si ottiene usando coloranti, sostanze che, a contatto con un supporto adatto, si legano ad esso in modo durevole, trasmettendone il colore. I coloranti più usati sono l'ematossilina e l'eosina, ma esiste una grande varietà di coloranti a seconda del tessuto da colorare.
• Montaggio e immersione: Una volta che i preparati sono stati sciacquati, devono essere montati definitivamente. I mezzi di montaggio possono essere acquosi o non acquosi; il tipo utilizzato dipende dal relativo protocollo. Esempi di mezzi di montaggio sono DPX, Canada Balsam e Eukitt^®. I mezzi di immersione sono liquidi, spesso oli naturali, che hanno un indice di rifrazione definito. È importante che l'indice di rifrazione sia circa 1,5 (lo stesso indice del vetro). Questo permette un'immersione omogenea dell'olio. A questo scopo, si usa l'olio d'immersione o l'olio di cedro.
• Analisi microscopica: Questa è la fase di osservazione microscopica. Non sono necessari altri reagenti.

Puoi trovare la nostra gamma di prodotti per istologia PanReac AppliChem qui sopra. Potete acquistare questi prodotti attraverso la nostra rete globale di distributori.

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