TB-Medium - Pulver (Terrific Broth)

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Terrific-Broth erlaubt aufgrund seines hohen Nährstoffgehaltes ein dichteres Wachstum von Bakterien als z.B. LB-Medium und ist deshalb besonders für die Kultivierung von Bakterien für Plasmidpräparationen (in der Regel Derivate des Stammes E. coli K-12) im großen Maßstab ('Maxi-Prep.') geeignet. Für die Herstellung von 1 Liter TB-Medium werden 36 g Pulver benötigt. Zusätzlich werden Glycerin (4 ml/L) und eine Phosphat-Pufferlösung (10X, Anzusetzten wie in der Anleitung beschrieben) benötigt Anleitung zum Ansetzen des Flüssigmediums (1 Liter): 36g Pulver werden in 900 ml Wasser aufgelöst und pro Liter Medium 4 ml Glycerin (A1123) zugegeben und autoklaviert. Vor dem Animpfen mit Bakterien werden 100 ml einer sterilen 10X Phosphat-Pufferlösung und ein Antibiotikum (entsprechend dem transformierten Plasmid) zugegeben. Vorsicht, Antibiotika und andere "Nahrungs"zusätze erst zu dem autoklavierten Medium geben, wenn es unter 50°C abgekühlt ist, da viele dieser Substanzen hitzeempfindlich sind! Für die 10X Phosphat-Pufferlösung werden 23,1 g Kaliumdihydrogenphosphat (z.B. A3095) und 125,4 g di-Kaliumhydrogenphosphat (z.B. A1042) in 1 L Wasser gelöst und die Lösung sterilisiert. Hinweis: Die Phosphate müssen getrennt vom Medium getrennt autoklaviert werden, da sonst schwerlösliche Phosphate (Calcium und Magnesium) ausfallen können.

Literature

(1) Sambrook, J., Fritsch, E.F. & Maniatis, T. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. (2) Ausubel, F.A., Brent, R., Kingston, R.E., Moore, D.D., Seidman, J.G., Smith, J.A. & Struhl, K. (eds.) (1995) Current Protocols in Molecular Biology. Greene Publishing & Wiley-Interscience, New York.